سئوال و جواب دوستانی که در وبلاگ قبلی با ما در تماس بودند (ادامه پست قبلی)
ناشناس گفت...
سلام
ممنون از توضیحات قبلیتان، اگرممکنه بفرمایید میزان lodder مصرفی هنگام لود کردن نمونه هایی به حجم 30 یا 20 ماکرولیتر چقدر باید باشد؟و سئوال دیگر اینکه چرا محلول sds بیست درصدی که تهیه و اتوکلاو می کنم پس از 5-6 روز رسوب می دهد(محلول را به phنرساندم)و آیا استفاده از آن پس از گرم کردنش که دوباره شفاف شده است ، برای sds-page اشکالی ندارد؟یا باید دوباره تهیه شود؟ در ضمن شما گفته اید محلول آمونیوم پر سولفات 10% را می توان طولانی مدت نگهداری کرد اما در سایر منابع توصیه شده که تازه تهیه و استفاده شود، می توانم بپرسم آیادر تجربیات خودتان این دو حالت تفاوتی در نتیجه کار داشتند یا نه؟ با تشکر sh
4/5/10 22:42
ابوذر عسکری گفت...
با سلام
دوست عزیز sh
شما برای آماده کردن نمونه ، و لود کردن آن ، باید 20 لاندا(میکرولیتر)از نمونه را با 80 لاندا لودر مخلوط نمایید. و پس از مخلوط کردن ، 20 لاندا از این نمونه را در چاهک بریزید.(در روش sds page لودر شما sds و مرکاپتو اتانول دارد و مخلوط را قبل از ریختن در چاهک 10 دقیقه حرارت می دهید.ولی در روش PAGE یا native لودر شما sds و مرکاپتو اتانول ندارد و نیاز به حرارت دادن نیست).
محلول sds معمولا در یخچال رسوب می کند. معمولا می گویند که تازه استفاده شود ، اما بنده آن را پس از خارج کردن از یخچال و قرار دادن در دمای محیط ، و چک کردن اینکه خراب نشده باشد و احیانا ذره نداشته باشد ، بدون هیچ مشکلی استفاده می کنم .و اینکه می گویید که اتوکلاو می کنید ، برای چه علتی است ؟ اگر می شود توضیح دهید.
در منابع ذکر شده است که آمونیوم پر سولفات تازه تهیه و استفاده شود .اما به دلیل سختی و همچنین خطرات احتمالی(سرطان زا بودن ) که در تهیه این محلول وجود دارد ، با شرایطی می توان از قبل آن را درست کرده باشید.
1- در دمای بسیار پایین باشد (فریز)
2- در میکروتیوب های یک ام الی جدا کرده باشید.
3- به آن نور نخورد.
پس شما می توانید مثلا 10ml از آمونیوم پر سولفات را درست کنید و بلا فاصله آن را به 10 میکروتیوب 1ml انتقال دهید. و همه میکروتیوب ها را در ظرفی که نور به آن نخورد قرار داده و ظرف را در فریزر بگذارید. هنگام نیاز به تعداد لازم از میکروتیوب ها را برداشته و استفاده نمایید ، اما مقدار اضافی را out کنید .
بنده از این روش استفاده می کنم و هیچ مشکلی پیش نیامده است .
به خاطر این می گویند تازه استفاده کنید ، چون این ماده در مجاورت نور رادیکال آزاد تولید می کند و این رادیکالها بسیار واکنش پذیرند . اگر شما از محیط آنها نور و گرما را حذف کنید ، دیگر رادیکال آزاد تولید نمی کند و پایدار باقی می ماند.
7/5/10 03:50
ناشناس گفت...
سلام خسته نباشید
ممنون از پاسخ کاملتان. علت اینکه sds را اتوکلاو می کنم ، نگهداری طولانی مدت آن است البته نمی دانم تا چه حد ضروری یا درست است؟ معمولا محلول هایی که می خواهیم طولانی مدت نگهداری کنیم مثل بافر فسفات پتاسیم و یا تریس هیدروکلراید را اتوکلاو می کنیم، اما در مورد sds محلول پس از 3-4 روز در دمای محیط حالت کلوئیدی(ابر یا رشته های سفید رنگ معلق در مایع شفاف)پیدا می کند که پس از قرار دادن در بن ماری و حرارت دیدن ،مجددا شفاف می شود و من در این حالت از آن استفاده می کنم( کارم اشتباه نیست؟).سئوال دیگری هم دارم اگر ممکنه بفرمایید آیا محلول رنگ آمیزی ژلsds قابلیت مصرف برای 2 یا 3 بار را دارد؟یعنی استفاده مجدد از این محلول که یکبار هم ژلی را رنگ آمیزی کرده، پس از یکی دو هفته، درست است؟ در ضمن اگر آزمایشگاهی فاقد هود موثری باشد به چه ارگانی باید مراجعه کنیم؟
باسپاس sh
7/5/10 11:38
ابوذر عسکری گفت...
با سلام
جناب sh
به نظر بنده sds را اتوکلاو نکن . کم درست کن ، مثلا 5 الی 10 ml . تا نیاز به اتو کلاو نباشد.
برای شفاف شدن از بن ماری استفاده نکن . در دمای محیط به راحتی شفاف می شود.
اگر رنگ را در هنگام رنگ کردن ژل در ظرفی سر بسته استفاده کنید . بهتر است . چون مواد فرار آن خارج نمی شود .
به هر حال از آن می توانید ، بارها و بارها استفاده کنید و اگر احساس کردید بوی الکل یا اسید استیک آن کم شده می توانید ، مقداری به آن اضافه کنید ، اما اضافه کردن آنها باید متناسب باشد . اما همان روش اول یعنی جلوگیری از فرار مواد فرار ، یعنی استفاده از ظرفی که درب مناسب دارد ، بهترین گزینه است.(ظرف حاوی ژل ، در هنگام رنگ بری و ظرف نگهداری رنگ).
منظور شما را از مراجعه به ارگان متوجه نشدم .
8/5/10 19:17
ادامه مطلب برای اعضاء
*** >>> استفاده از مطالب این وبلاگ بدون ذکر منبع جایز نیست <<< ***
[+] نوشته
شده توسط ابوذر عسکری در سه شنبه 21 آبان 1389برچسب:سئوال و جواب,
در ساعت16:11 | |
سئوال و جواب دوستانی که در وبلاگ قبلی با ما در تماس بودند
سودابه نیک نیا گفت...
سلام...
من دانشجوی کارشناسی ارشد بیوشیمی هستم... میشه بدونم شما در چه مرکز یا دانشگاه یا ازمایشگاهی کار می کنید؟
17/11/09 22:23
ابوذر عسکری گفت...
با سلام
از تأخیر به وجود آمده در ارسال جواب پوزش می طلبم . این سئوال را بعضی از دوستان پرسیده اند , اما بنده به علت پاره ای از مسائل , تمایل چندانی به ارتباط این وبلاگ و محل کار خود ندارم . به هر حال جواب به این پرسش منوط به هدف شما از ذکر این سئوال می باشد .
25/11/09 09:27
ناشناس گفت...
از شما به خاطر ، مطالب خوب و ارزشمندی که در این وبلاگ گذاشته اید ، تشکر می کنم .
با توجه به تجربیات شما در زمینه خالص سازی پروتئین ها ، بنده خواهان ارتباط تنگاتنگ با شما در این زمینه می باشم .
اگر شما مایل باشید در دو طرح تولیدی مشاور و راه گشای ما باشید ، کمال امتنان را خواهیم داشت .
با تشکر
دکتر موسوی
19/12/09 10:23
mahtab گفت...
سلام و با عرض خسته نباشید من کاراموز اداره ی استاندارد استان سمنان هستم و برای گزارش کار پایانی خودم موظف به تهیه ی گزارشی از نحوه ی اندازه گیری پروتئین متداول در صنعت هستم .به همین خاطر نیاز به کمک شما در این زمینه دارم اگر مقدور میباشد منو در این زمینه یاری کنید و
با تشکر رمضانی
29/12/09 13:58
ابوذر عسکری گفت...
با سلام
کاربر گرامی mahtab خانم
روشهاي گوناگوني براي سنجش پروتئين مواد غذايي وجود دارد كه با توجه به تعداد نمونه،نوع نمونه ،سرعت عمل اندازه گيري مي توان هر يك را به كار برد. روش ماكروكلدال در مقايسه با ساير روشها ساده تر و دقيق تر بوده و به عنوان يك روش استاندارد مورد قبول است .در این روش دستگاه کجلدال نیاز است .در صورت نیاز به توضیح این روش به بنده اطلاع دهید.
با تشکر
مدیر وبلاگ
30/12/09 08:41
ادامه مطلب برای اعضاء
*** >>> استفاده از مطالب این وبلاگ بدون ذکر منبع جایز نیست <<< ***
[+] نوشته
شده توسط ابوذر عسکری در سه شنبه 14 آبان 1389برچسب:سئوال و جواب,
در ساعت13:31 | |
عرض پوزش از وقفه پیش آمده
دوستان گرامی و محققین عزیز:
به خاطر اشکالاتی که در وبلاگ قبلی ، که از سرور بلاگر استفاده می کرد ، پیش آمده بود و همچنین (فی لتر) عکسها توسط کشور عزیزمان و عدم پاسخگویی ایشان به اینجانب ، بنده تصمیم گرفتم که آدرس را عوض کنم و از سرور دیگری استفاده کنم. متأسفانه بعضی از سایتهای علمی نیز درگیر با (فی لترینگ) اتوماتیک می شوند و وبلاگ پیشین ما هم در قسمت عکس ها دچار این مشکل شده بود و تمام جدول ها و اطلاعاتی که به صورت تصویر بود ، دچار این مشکل شده بود .
بدیهی است انتقال تمام مطالب وبلاگ پیشین ، به این وبلاگ کمی وقتگیر است . همچنین در وبلاگ قبلی ، دوستان سئوالاتی مطرح کرده بودند ، که همراه با جواب آنها ، به این وبلاگ انتقال می دهم . مطمئن هستم که خواندن آنها مفید واقع خواهد شد.
با تشکر
*** >>> استفاده از مطالب این وبلاگ بدون ذکر منبع جایز نیست <<< ***
[+] نوشته
شده توسط ابوذر عسکری در 7 آبان 1389برچسب:,
در ساعت23:54 | |
درباره وبلاگ
پذیرش مقالات ,آموزش , مشاوره و شرکت در طرحهای تحقیقاتی و تولیدی و پایان نامه های دانشجویی در رابطه با تخلیص پروتئین ها با روشهایی مثل الکتروفورز کروماتوگرافی و غیره (وابسته به مؤسسه تحقیقات واکسن وسرم سازی رازی ، کرج)
روز بخير كاربر مهمان! 
