هدف :

تهیه نمونه جهت بردن روی ستون کروماتوگرافی ( نمونه گذاری ) بدون اینکه به ژل ستون کروماتوگرافی آسیب زده شود .

کاربرد :

برای نمونه گذاری روی ستون های کروماتوگرافی محتوی انواع ژل های مختلف

مواد و تجهیزات :

۱- سانتریفوژ

۲- لوله های مخصوص سانتریفوژ

۳- فیلتر مناسب

۴- سرنگ

۵- PH متر

۶- ترازو

۷- استوانه مدرج

۸- مواد شیمیایی ( متناسب با نوع بافر شستشو مواد شیمیایی متغیر است ) .

ملاحظات ایمنی :

۱- برای جلوگیری از خطرات بیولوژیک , الرژیک و شیمیایی , پوشیدن روپوش و کفش و دستکش ضروری می باشد .

۲- برای جلوگیری از خراب شدن سانتریفوژ و یا بروز خطر , قبل از سانتریفوژ کردن , باید لوله های حاوی نمونه دو به دو هم وزن باشند .

روش کار :

۱- ابتدا با توجه به نوع بافر شستشو باید Sample بافری از همان نوع , اما با غلظت 2 برابر تهیه می کنید .

۲- PH و دمای سمپل بافر را با PH و دمای بافر شستشو , یکسان تنظیم می کنیم .

۳- حجم نمونه خود را با استوانه مدرج اندازه بگیرید .

۴- به اندازه حجم نمونه , از سمپل بافر به آن اضافه می کنیم .( باید دمای سمپل بافر و نمونه یک اندازه باشد ) .

۵- PH را چک می نماییم . اگرPH تغییر کرد , PH را دوباره تنظیم می کنیم.

۶- اگر نمونه دارای ذرات معلق زیادی باشد , می توان نمونه را به مدت 15 دقیقه و 3000 دور سانتریفوژ کرد .

۷- سپس نمونه را توسط فیلتر و سرنگ می کنیم .

۸- دوباره PH را چک می نماییم . اگرPH تغییر کرد , PH را دوباره تنظیم می کنیم.

۹- حال اگر نمونه ذرات معلق نداشته باشد , نمونه آماده نمونه گذاری بر روی ستون می باشد .

نکته :

برای اینکه نمونه بر روی ژل رسوب نکند , باید به موارد زیر دقت کرد .

۱- باید جنس بافر نمونه با جنس بافر شستشو یکسان باشد .

۲- باید PH نمونه با PH بافر شستشو یکسان باشد .

۳- باید دمای نمونه با دمای بافر شستشو یکسان باشد .

۴- باید نمونه عاری از هرگونه ذرات معلق باشد .

۵- برای یکسان سازی نمونه و بافر شستشو از دیالیز نیز می توان استفاده کرد .

گزارش :

۱- بر روی ظرف نمونه مشخصات آن را قید می کنیم ( تاریخ , نام شخص , مواد متشکله و PH).

۲- گزارش تهیه نمونه را در دفتر کارهای روزمره آزمایشگاه ثبت می کنیم .

نویسنده : ابوذر عسکری